一、滅菌操作
1. 關(guān)閉所有供水管路及空氣管路。開(kāi)啟蒸汽管路閥門(mén)。同時(shí)稍開(kāi)啟發(fā)酵罐夾套的排氣閥門(mén),排放夾套剩水。
2. 開(kāi)啟發(fā)酵罐攪拌電機,轉速至200rpm,使發(fā)酵液受熱均勻。當溫度升到95℃以上時(shí),即可停止攪拌。然后待溫度升至121℃(罐壓在0.1~0.12Mpa)時(shí)即可計時(shí)開(kāi)始。
3. 當計時(shí)開(kāi)始后,發(fā)酵時(shí)間一般為20-30分鐘。在此時(shí)間內應保證溫度不低于120℃.同時(shí)可進(jìn)行空氣過(guò)濾器及空氣管道的滅菌。
4. 空氣過(guò)濾器及空氣管道的滅菌:稍開(kāi)過(guò)濾器的排水閥門(mén),及空氣管道的隔膜閥,保證空氣管道的蒸汽滅菌。但不能開(kāi)的太大,以免蒸汽大量進(jìn)入罐內,而稀釋培養基。
5. 出料、采樣閥的蒸汽閥門(mén)及出口閥稍開(kāi),保證該管路滅菌。在發(fā)酵罐的蓋上的接種口,同樣需要放氣,使其達到滅菌要求。
6. 當保溫結束時(shí),應先把空氣管路中的隔膜閥關(guān)閉。把空氣過(guò)濾器排水閥關(guān)閉,以及關(guān)閉取樣閥出口閥門(mén)和接種口螺帽。然后再關(guān)閉各路蒸汽閥門(mén)。
7. 打開(kāi)冷卻水閥門(mén)及排水閥門(mén),同時(shí)打開(kāi)空氣流量計和空氣放空閥門(mén),把空氣過(guò)濾器吹干。此時(shí)必須注意罐壓的變化。絕對不能讓罐壓低于0.02Mpa。及當罐壓達到0.05Mpa時(shí),立即將空氣管路打開(kāi),保證發(fā)酵罐的罐壓在0.05Mpa左右。
8. 當溫度降到95℃時(shí),即可打開(kāi)攪拌。當溫度低于50℃后,即可切入自動(dòng)控溫狀態(tài),使培養基達到接種溫度,滅菌過(guò)程即告結束。
二、發(fā)酵過(guò)程的操作
1. 接種:接種方法可采用火焰接種法或差壓接種法。
(1)火焰接種法:在接種口用酒精火圈消毒,然后打開(kāi)接種口蓋,迅速將接種液倒入罐內,在把蓋擰緊。
(2)差壓法:在滅菌前放入墊片,接種時(shí)把接種口蓋打開(kāi),先倒入一定量的酒精消毒。待片刻后把種液瓶的針頭插入接種口的墊片。利用罐內壓力和種液瓶?jì)鹊膲毫Σ,將種液引入罐內,擰緊蓋子。
2. 罐壓
發(fā)酵過(guò)程中須手動(dòng)控制罐壓,即用出口閥控制罐內壓力。調節空氣流量的,須同時(shí)調節出口閥,應保持罐內壓力恒定大于0.03Mpa。
3. 溶解氧(DO)的測量和控制
(1)溶解氧的標定:在接種前,在恒定的發(fā)酵溫度下,將轉速及空氣量開(kāi)到最大值時(shí)的溶解氧DO值作為100%。
(2)發(fā)酵過(guò)程的溶解氧DO測量和控制:DO的控制可采用調節空氣流量和調節轉速來(lái)達到。最簡(jiǎn)單是轉速和溶氧的關(guān)聯(lián)控制。其次則必須同時(shí)調節進(jìn)氣量(手動(dòng))控制。有時(shí)需要通入純氧(如在某些基因工程菌的高密度培養中)才能達到要求的DO值。
4. pH 的測量與控制
(1) pH值的校正:在滅菌前應對PH電極進(jìn)行PH值的校正。
(2)在發(fā)酵過(guò)程中PH值的控制使用蠕動(dòng)泵的加酸加堿來(lái)達到的,酸瓶或堿瓶須先在滅菌鍋中滅菌。
三、控制器的操作
1. 控制器的啟動(dòng):打開(kāi)電源,先按一下薄膜鍵盤(pán)上的“S/E”鍵,再按一下“確認”鍵,發(fā)酵控制程序啟動(dòng);這時(shí),如果加熱器中水沒(méi)有加滿(mǎn),程序會(huì )自動(dòng)進(jìn)行進(jìn)水操作;待水加滿(mǎn)后,用戶(hù)可以按照上述的下位機控制器的操作方法進(jìn)行對各個(gè)執行機構進(jìn)行控制。
2. 控制器的操作:使用F1~F6按鍵將液晶屏中的界面切換到用戶(hù)需要控制的界面中,使用方向鍵將界面中的光標移動(dòng)到需要控制的變量上,如果是改變運行模式,直接按確認鍵即可,如果需要鍵盤(pán)輸入數字,在輸入數字后按確認鍵即可。如:
(1)溫度控制:在手動(dòng)方式中,對溫度進(jìn)行手動(dòng)操作是比較簡(jiǎn)單,只需要改變手動(dòng)狀態(tài)的控制量即可。通過(guò)選擇快捷鍵(F1~F5)進(jìn)入到溫度控制界面,然后移動(dòng)光標使它指向到“手動(dòng)方式”,按下“確認”鍵,即進(jìn)入溫度控制的手動(dòng)方式中。此時(shí),“手動(dòng)方式”后面會(huì )出現一個(gè)小手來(lái)指示當前的選擇是手動(dòng)方式。將光標移動(dòng)到手動(dòng)設置區域, 通過(guò)上下移動(dòng)光標選擇到“控制量”。通過(guò)按數字鍵輸入所需要設定的控制量輸出值,如80,并按“確認”鍵確認;(注:控制量范圍為0~100,當輸入控制量大于50時(shí)為加熱狀態(tài),反之為冷卻狀態(tài))。
(2)轉速的控制:使用光標移動(dòng)鍵,移動(dòng)光標到“設定值”處。在數字鍵盤(pán)上輸入 300, 此時(shí)的“設定值”后應該出現“300”的數值;然后按下“確認”鍵確定輸入。若輸入有錯誤,可以按“清除”鍵清除數據。
四、蒸汽發(fā)生器的操作
1. 打開(kāi)進(jìn)水管開(kāi)關(guān),使蓄水箱水位至最高,保持進(jìn)水狀態(tài)
2. 連接發(fā)生器電源,向鍋內供水至正常水位(液位管的50-80%),不得超過(guò)最高水位,且不得低于最低水位,關(guān)閉蒸汽出汽閥門(mén)
3. 插上電源,打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)工作指示燈亮,開(kāi)始加熱鍋水
4. 將蒸汽管連接至發(fā)酵罐體夾層管路系統,打開(kāi)相關(guān)閥門(mén),保持管路通暢,同時(shí)關(guān)閉發(fā)酵罐體出氣閥。當壓力升至工作壓力后(2kg/cm2)打開(kāi)蒸汽出汽閥,即可供汽
5.使用完畢,先關(guān)閉電源,后關(guān)閉進(jìn)水管,待發(fā)生器適當降溫后,排掉鍋體中污水。
【注 意 事 項】
1. 安全閥的調定壓力已由廠(chǎng)家調整好,不得隨意調整,若發(fā)現安全閥失靈,應更換新的安全閥。嚴禁私自改 變壓力自動(dòng)控制功能和參數。
2. 在正常運行期間,至少每8小時(shí)排污一次,并及時(shí)用砂紙給水位探針除垢
3. 在使用過(guò)程中,嚴禁關(guān)閉安全閥門(mén),嚴禁私自改裝或用堵頭堵死
4. 壓力表存水彎管應定期拆下清洗
五、空氣壓縮機的操作
1. 插上空壓機電源,開(kāi)啟空壓機,使機器在無(wú)負荷狀態(tài)下啟動(dòng)運轉15分鐘。
2. 啟動(dòng)后若無(wú)異音,關(guān)閉空氣出口,并將空壓機出氣管與空氣凈化器相連,一并聯(lián)至發(fā)酵罐空氣進(jìn)氣管路。
3. 當氣壓升至2kg/cm2打開(kāi)供氣閥,開(kāi)啟空氣開(kāi)關(guān),向已滅菌的發(fā)酵罐提供無(wú)菌空氣?諝鈮毫_到設定壓力之后,壓力開(kāi)關(guān)自動(dòng)切斷電源,電機停止運轉。
4. 空氣壓縮機的使用壓力不得高于額定工作壓力,若需調整,必須有專(zhuān)門(mén)業(yè)務(wù)員進(jìn)行,不得自行調整。
六、保養與維護
1、精密過(guò)濾器,一般使用期限為一年。如果過(guò)濾阻力太大或失去過(guò)濾能力致影響正常生產(chǎn),則需清洗或更換(建議直接更換,不作清洗,因清洗操作后不能可靠保證過(guò)濾器的性能)。
2、清洗發(fā)酵罐時(shí),請用軟毛刷進(jìn)行刷洗,不要用硬器刮擦,以免損傷發(fā)酵罐表面。
3、配套儀表應每年校驗一次,以確保正常使用。
4、電器、儀表、傳感器等電氣設備嚴禁直接與水、汽接觸,防止受潮。
5、設備停止使用時(shí),應及時(shí)清洗干凈,排盡發(fā)酵罐及各管道中的余水;松開(kāi)發(fā)酵罐罐蓋及手孔螺絲,防止密封圈產(chǎn)生永久變形。
6、操作平臺、恒溫水箱等碳鋼設備應定期(一年一次)刷油漆,防止銹蝕。
7、經(jīng)常檢查減速器油位,如潤滑油不夠,需及時(shí)增加。
8、定期更換減速器潤滑油,以延長(cháng)其使用壽命。
9、如果發(fā)酵罐暫時(shí)不用,則需對發(fā)酵罐進(jìn)行空消,并排盡罐內及各管道內的余水。
七、注意事項
1、必須確保所有單件設備能正常運行時(shí)使用本系統。
2、在消毒過(guò)濾器時(shí),流經(jīng)空氣過(guò)濾器的蒸汽壓力不得超過(guò)0.17MPa,否則過(guò)濾器濾芯會(huì )被損壞,失去過(guò)濾能力。
3、在發(fā)酵過(guò)程中,應確保罐壓不超過(guò)0.17MPa。
4、在實(shí)消過(guò)程中,夾套通蒸汽預熱時(shí),必須控制進(jìn)汽壓力在設備的工作壓力范圍內(不應超過(guò)0.2MPa),否則會(huì )引起發(fā)酵罐的損壞。
5、在空消及實(shí)消時(shí),一定要排盡發(fā)酵罐夾套內的余水。否則可能會(huì )導致發(fā)酵罐內筒體壓扁,造成設備損壞;在實(shí)消時(shí),還會(huì )造成冷凝水過(guò)多導致培養液被稀釋?zhuān)瑥亩鵁o(wú)法達到工藝要求。
6、在空消、實(shí)消結束后冷卻過(guò)程中,嚴禁發(fā)酵罐內產(chǎn)生負壓,以免造成污染,甚至損壞設備。
7、在發(fā)酵過(guò)程中,罐壓應維持在0.03~0.05MPa之間,以免引起污染。
8、在各操作過(guò)程中,必須保持空氣管道中的壓力大于發(fā)酵罐的罐壓,否則會(huì )引起發(fā)酵罐中的液體倒流進(jìn)入過(guò)濾器中,堵塞過(guò)濾器濾芯或使過(guò)濾器失效。